當(dāng)歸揮發(fā)油對大鼠十二指腸慢波肌電活動(dòng)的作用討論論文
當(dāng)歸揮發(fā)油為常用中藥當(dāng)歸的主要有效組分之一。研究表明，當(dāng)歸揮發(fā)油含有藁本內(nèi)酯、正丁烯基苯酞內(nèi)酯等多種成分。近年來本課題組研究表明，當(dāng)歸揮發(fā)油對機(jī)體平滑肌具有廣泛的藥理活性，且認(rèn)為當(dāng)歸揮發(fā)油可能在防治胃腸道平滑肌動(dòng)力紊亂性疾病方面具有重要的應(yīng)用價(jià)值。本研究采用生物信號(hào)采集分析系統(tǒng)，觀察當(dāng)歸揮發(fā)油對大鼠十二指腸肌電活動(dòng)的影響，從電生理角度分析當(dāng)歸揮發(fā)油對腸平滑肌作用的特點(diǎn)和規(guī)律，為進(jìn)一步開發(fā)當(dāng)歸的藥用價(jià)值提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
1 材料和方法
1. 1 試驗(yàn)藥物當(dāng)歸揮發(fā)油，岷縣康達(dá)藥業(yè)開發(fā)有限責(zé)任公司提供( 取生當(dāng)歸飲片1kg，置于5L 超臨界萃取設(shè)備進(jìn)行CO2超臨界流體萃取，萃取壓力為25MPa，萃取溫度為40℃，萃取時(shí)間為6 小時(shí)、CO2流量為2L/kg·h，當(dāng)歸萃取液過濾，濾液靜置，取油層，得8. 2g 揮發(fā)油，當(dāng)歸揮發(fā)油含量為0. 82g /100g 藥材，所得當(dāng)歸揮發(fā)油經(jīng)GC-MS 分析，藁本內(nèi)酯含量為81. 4%。) ，實(shí)驗(yàn)時(shí)用0. 1%泊洛沙姆-127 配制0. 4%、0. 2%、0. 1% 的當(dāng)歸揮發(fā)油乳狀液。鹽酸多巴胺注射液( 江蘇亞邦強(qiáng)生藥業(yè)有限公司，批號(hào)130316) ; 多潘立酮片( 西安楊森制藥有限公司，批號(hào)130410523) ; 甲硫酸新斯的明注射液( 浙江仙琚制藥股份有限公司，批號(hào)120301) ; 硫酸阿托品注射液( 天津金耀氨基酸有限公司，批號(hào)1207071) ，鹽酸維拉帕米( 上海信誼藥廠有限公司，批號(hào)120601) ; 氯化鋇( 天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司，XK 13-201-00520) 。
1. 2 動(dòng)物Wistar 大鼠，雌雄兼用，體質(zhì)量180 ～ 220g，SPF 級(jí)，由甘肅中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證編號(hào): SCXK( 甘)2011-0001，SPF 級(jí)飼料( 由北京科奧協(xié)力飼料有限公司供給) 喂養(yǎng)，自由飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)3 天后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
1. 3 試劑泊洛沙姆( 上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)2014 /12) 。
1. 4 儀器BL-420F 生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，成都泰盟科技有限公司; 動(dòng)物恒溫手術(shù)臺(tái)ST-1 型。
1. 5 方法取大鼠，禁食不禁水18 h， 10% 水合氯醛( 0. 33ml /100g) 腹腔注射麻醉，仰位固定，腹部備皮，常規(guī)消毒，劍突下正中做3 ～ 5cm 切口，暴露胃及小腸。自幽門向下將針狀電極從十二指腸( 幽門下2 cm 處) 垂直縱行肌刺入漿膜下2mm 肌層固定( 電極直徑0. 3 mm，電極間距離約0. 3cm) ，參考電極夾于皮下，電極輸入端與BL-420F 生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)相連接。設(shè)置參數(shù)即可進(jìn)行信號(hào)的采集，記錄過程中在腸管上方覆蓋溫生理鹽水紗布，同時(shí)控制室溫在25℃。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)，BL-420F 生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的采集參數(shù)設(shè)置為: 增益500μV，時(shí)間常數(shù)0. 3s，濾波50Hz，掃描速度500ms /div，50Hz 限波開啟，以SWMF 和SWMA 作為主要統(tǒng)計(jì)指標(biāo)，以5min 為時(shí)間段，記錄慢波肌電圖，計(jì)算平均SWMF 和SWMA。
2 結(jié)果
2. 1 當(dāng)歸揮發(fā)油對正常大鼠十二指腸慢波肌電的影響取大鼠24 只，隨機(jī)分為4 組，設(shè)正常對照組和當(dāng)歸揮發(fā)油0. 04mg /kg、0. 02mg /kg、0. 01mg /kg 劑量組，每組6 只，按上述方法建立測試系統(tǒng)，觀察記錄各組大鼠十二指腸慢波肌電波形，待穩(wěn)定后，記錄給藥前5min 內(nèi)慢波肌電圖; 當(dāng)歸揮發(fā)油三種劑量組大鼠分別尾靜脈注射0. 04mg /kg、0. 02mg /kg、0. 01mg /kg 的當(dāng)歸揮發(fā)油乳濁液10ml /kg，正常對照組給予0. 1%泊洛沙姆生理鹽水溶液10ml /kg。分別記錄給藥后第10、20、40、60min 起始5min 內(nèi)慢波肌電圖，計(jì)算平均SWMF 和SWMA。結(jié)果顯示，不同劑量的.當(dāng)歸揮發(fā)油對正常大鼠十二指腸SWMF 和SWMA 的影響不明顯，給藥后60min 內(nèi)，與正常對照組比較，組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2. 2 當(dāng)歸揮發(fā)油對多潘立酮誘導(dǎo)的大鼠十二指腸肌電的影響取大鼠36 只，隨機(jī)分為6 組，設(shè)正常對照組、模型對照組、多巴胺對照組和當(dāng)歸揮發(fā)油0. 04mg /kg、0. 02mg /kg、0. 01mg /kg三個(gè)劑量組，每組6 只，按上述方法建立測試系統(tǒng)，觀察記錄各組大鼠十二指腸慢波肌電波形，待穩(wěn)定后，除正常對照組大鼠灌胃10ml /kg 生理鹽水外，其余各組大鼠灌胃3mg /kg 多潘立酮， 30min 后，記錄5min 內(nèi)慢波肌電作為給藥前對照值。第40min，除正常對照組和模型對照組尾靜脈注射0. 1% 泊洛沙姆生理鹽水溶液10ml /kg 外，當(dāng)歸揮發(fā)油三個(gè)劑量組大鼠分別尾靜脈注射0. 04mg /kg、0. 02mg /kg、0. 01mg /kg 的當(dāng)歸揮發(fā)油乳濁液10ml /kg，多巴胺對照組肌內(nèi)注射0. 02mg /kg 多巴胺注射液，分別記錄第10、20、40、60min 起始5min 內(nèi)大鼠十二指腸慢波肌電圖，計(jì)算平均SWMF 和SWMA。
結(jié)果顯示，與正常對照組比較，模型對照組大鼠SWMF 加快，SWMA 明顯增強(qiáng); 與模型對照組比較，多巴胺對照組SWMF減慢、SWMA 減弱，0. 04mg /kg 和0. 02mg /kg 當(dāng)歸揮發(fā)油組SWMF 和SWMA 均減弱，0. 01mg /kg 當(dāng)歸揮發(fā)油組SWMF 加快，而SWMA 減弱。
2. 3 當(dāng)歸揮發(fā)油對新斯的明誘導(dǎo)的大鼠十二指腸肌電的影響分組、給藥與測試方法同2. 2. 2，實(shí)驗(yàn)大鼠肌內(nèi)注射0. 1mg /kg甲硫酸新斯的明建立腸功能亢進(jìn)模型，對照組肌內(nèi)注射1. 0mg /kg 硫酸阿托品，當(dāng)歸揮發(fā)油0. 04mg /kg、0. 02mg /kg、0. 01mg /kg三個(gè)劑量組分別于給當(dāng)歸揮發(fā)油后記錄第10、20、40、60min 起始5min 內(nèi)大鼠十二指腸慢波肌電圖，計(jì)算平均SWMF 和SWMA。結(jié)果顯示，與正常對照組比較，模型對照組大鼠SWMF 加快，SWMA 明顯增強(qiáng); 與模型對照組比較，硫酸阿托品對照組SWMF 減慢、SWMA 減弱，0. 04mg /kg 和0. 02mg /kg 當(dāng)歸揮發(fā)油組SWMF 和SWMA 均減弱，0. 01mg /kg 當(dāng)歸揮發(fā)油組SWMF 減慢。
2. 4 當(dāng)歸揮發(fā)油對氯化鋇誘導(dǎo)大鼠十二指腸肌電的影響分組、給藥與測試方法同2. 2. 2，實(shí)驗(yàn)大鼠腹腔注射0. 02mg /kgBaCl2建立腸功能亢進(jìn)模型，對照組腹腔注射2. 4mg /kg 鹽酸維拉帕米，當(dāng)歸揮發(fā)油0. 04mg /kg、0. 02mg /kg、0. 01mg /kg 劑量組分別于給當(dāng)歸揮發(fā)油后記錄第10、20、40、60min 起始5min 內(nèi)大鼠十二指腸慢波肌電圖，計(jì)算平均SWMF 和SWMA。
3 討論
十二指腸肌電活動(dòng)的指標(biāo)包括快波和慢波的振幅及頻率，但在本實(shí)驗(yàn)的過程中，使用BL-420F 生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)提供的區(qū)間測定方法，觀察到快波在麻醉動(dòng)物身上出現(xiàn)的時(shí)間集中在動(dòng)物有蘇醒跡象左右時(shí)，而其他時(shí)間段不易檢測到，快波的出現(xiàn)受麻藥的影響比較大，因此，在麻醉動(dòng)物在體檢測十二指腸肌電快波變化的可行性交差，本研究重點(diǎn)監(jiān)測慢波頻率和振幅的變化，探討胃腸功能狀態(tài)。現(xiàn)代研究認(rèn)為，胃腸運(yùn)動(dòng)是一種非常復(fù)雜、精細(xì)且高度協(xié)調(diào)的活動(dòng)，是消化系統(tǒng)最重要的生理功能之一，它要受神經(jīng)和體液多種因素的共同調(diào)節(jié)，通過內(nèi)分泌、旁分泌和神經(jīng)分泌而行使功能。目前已發(fā)現(xiàn)的常見的引起平滑肌收縮的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)和激素，如乙酰膽堿( Ach) 、P 物質(zhì)( SP) 、胃動(dòng)素( MTL) 、胃泌素( GAS) 等; 抑制性神經(jīng)遞質(zhì)和激素，如一氧化氮( NO) 、血管活性腸肽( VIP) 、生長抑素( SS) 、神經(jīng)降壓肽( NT)等。而激素的作用依賴于相應(yīng)的受體，研究發(fā)現(xiàn)的已參與調(diào)節(jié)胃腸道的受體主要包括5-HT 受體、組胺受體、膽堿能M 受體、多巴胺受體、腎上腺能受體( α 和βR) 以及多種胃腸激素受體。在調(diào)節(jié)過程中，不論是興奮性神經(jīng)遞質(zhì)的增多或減少還是抑制性神經(jīng)遞質(zhì)的增多或減少，均會(huì)使兩者原有的相對平衡遭到破壞，變成失衡狀態(tài)，從而導(dǎo)致胃電節(jié)律的異常，影響胃腸平滑肌舒縮活動(dòng)甚至出現(xiàn)紊亂而出現(xiàn)一系列的臨床癥狀。
關(guān)于當(dāng)歸揮發(fā)油對胃腸平滑肌的影響，前期在體實(shí)驗(yàn)和離體實(shí)驗(yàn)研究均顯示，對不同種屬動(dòng)物不同狀態(tài)下的胃腸平滑肌都存在一定的調(diào)節(jié)作用，甚至當(dāng)歸不同炮制品的揮發(fā)油以及不同提取方法所得的揮發(fā)油也均可不同程度的影響胃腸功能及活動(dòng)。本研究結(jié)果顯示，當(dāng)歸揮發(fā)油對麻醉大鼠十二指腸慢波肌電頻率和振幅均有影響，當(dāng)歸揮發(fā)油對多潘立酮、新斯的明和氯化鋇誘導(dǎo)的大鼠十二指腸平滑肌慢波肌電頻率的變化均呈現(xiàn)明顯的拮抗作用，由此可以初步推斷當(dāng)歸揮發(fā)油對胃腸平滑肌作用的靶部位有多巴胺受體、M 受體和鈣離子通道。
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