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分子生物學(xué)技術(shù)論文參考

時(shí)間:2021-03-29 18:05:16 論文 我要投稿

分子生物學(xué)技術(shù)論文參考

  隨著醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展,生物學(xué)也不斷在創(chuàng)新,其中,現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)起到關(guān)鍵作用。下面小編整理了分子生物學(xué)技術(shù)論文,歡迎閱讀!

分子生物學(xué)技術(shù)論文參考

  農(nóng)產(chǎn)品安全檢測(cè)中的分子生物學(xué)技術(shù)

  【摘 要】本文主要介紹了酶聯(lián)免疫分析技術(shù)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)、試紙條快速檢測(cè)技術(shù)、流動(dòng)注射免疫分析技術(shù)等分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)的原理、開發(fā)及其在農(nóng)產(chǎn)品中有毒有害物質(zhì)檢測(cè)中的應(yīng)用。

  【關(guān)鍵詞】農(nóng)產(chǎn)品;有毒有害物質(zhì);分子生物學(xué);檢測(cè)技術(shù)

  0 前言

  民以食為天,食以安為先。農(nóng)產(chǎn)品安全性要求農(nóng)產(chǎn)品中不應(yīng)含有可能損害或威脅人體的物質(zhì)或因素,它關(guān)系到人體健康和社會(huì)穩(wěn)定。隨著世界經(jīng)濟(jì)全球化、貿(mào)易自由化和農(nóng)產(chǎn)品國際貿(mào)易的迅速發(fā)展,農(nóng)產(chǎn)品安全已成為事關(guān)人民健康和構(gòu)建和諧社會(huì)的重大戰(zhàn)略問題,及時(shí)、安全、準(zhǔn)確地檢測(cè)出農(nóng)產(chǎn)品中的病原微生物是農(nóng)產(chǎn)品安全檢測(cè)的重要內(nèi)容。隨著農(nóng)產(chǎn)品分析物質(zhì)的不斷微量和痕量化,農(nóng)產(chǎn)品基質(zhì)的不斷復(fù)雜,僅使用傳統(tǒng)分析技術(shù)已難以解決所有的問題。分子生物學(xué)技術(shù)不僅可以簡化前處理過程、而且操作簡便、檢測(cè)成本低、安全可靠,且能進(jìn)行特異性處理分析,其在農(nóng)產(chǎn)品分析中占據(jù)越來越高的比例[1],目前在農(nóng)產(chǎn)品 檢測(cè)中常用的`技術(shù)包括:酶聯(lián)免疫分析技術(shù)(ELISA)、基因芯片技術(shù)、分子印跡技術(shù)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)、試紙條快速檢測(cè)技術(shù)、流動(dòng)注射免疫分析技術(shù)、生物傳感器技術(shù)(biosensor)等。分子生物學(xué)技術(shù)解決了傳統(tǒng)農(nóng)產(chǎn)品前處理所不能解決的問題,特別是在農(nóng)產(chǎn)品中有毒有害物質(zhì)檢測(cè)中發(fā)揮了重要的作用。

  1 應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品安全檢測(cè)中的分子生物學(xué)技術(shù)

  1.1 酶聯(lián)免疫分析技術(shù)

  酶聯(lián)免疫分析技術(shù)是20世紀(jì)70年代初期由荷蘭學(xué)者Weeman與Schurrs和瑞典學(xué)者Engvall與Perlman幾乎同時(shí)提出的。最初ELISA主要用于病毒和細(xì)菌的檢測(cè),20世紀(jì)70年代后期開始廣泛應(yīng)用于抗原、抗體的測(cè)定,范圍涉及到一些藥物、激素、毒素等半抗原分子的定性定量檢測(cè)。它是在RIA理論的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非放射性標(biāo)記免疫分析技術(shù)。它利用酶標(biāo)記物同抗原抗體復(fù)合物的免疫反應(yīng)與酶的催化放大作用相結(jié)合,既保持了酶催化反應(yīng)的敏感性,又保持了抗原抗體反應(yīng)的特異性,極大的提高了靈敏度,且克服了RIA操作過程中放射性同位素對(duì)人體的傷害。酶聯(lián)免疫分析法在農(nóng)產(chǎn)品安全檢測(cè)中最為常用[2]。農(nóng)獸 藥殘留免疫分析方法的建立包括待測(cè)物選擇、半抗原合成、人工抗原合成、抗體制備、測(cè)定方法建立、樣本前處理方法和方法評(píng)價(jià)等步驟。ELISA具有樣品前處理簡單,純化步驟少,大量樣本分析時(shí)間短,適合于做成試劑盒現(xiàn)場(chǎng)篩選等優(yōu)點(diǎn),使其可試驗(yàn)快速現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)測(cè),是現(xiàn)階段農(nóng)產(chǎn)品安全檢測(cè)領(lǐng)域應(yīng)用較多的一項(xiàng)檢測(cè)技術(shù)。目前酶聯(lián)免疫檢測(cè)的農(nóng)、獸藥殘留種類主要包括:有機(jī)磷農(nóng)藥、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥、有機(jī)氯類農(nóng)藥、氨基甲酸酯類、獸藥類等。

  1.2 PCR技術(shù)(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù))

  該技術(shù)誕生于1985年,由美國Cetus公司和加州大學(xué)聯(lián)合創(chuàng)建。PCR技術(shù)利用變性與復(fù)性原理,在體外使用DNA 聚合酶,在引物的引導(dǎo)和脫氧核糖核苷酸(dNTP)的參與下將模板在數(shù)小時(shí)內(nèi)進(jìn)行百萬倍擴(kuò)增。該技術(shù)可選擇性地放大特定的DNA序列,因此在農(nóng)產(chǎn)品致病性微生物檢測(cè)方面發(fā)揮著越來越重要的作用[3]。實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)是近年發(fā)展起來的新型技術(shù),該技術(shù)通過直接測(cè)定PCR 過程中熒光信號(hào)的變化,利用電腦分析軟件對(duì)PCR過程中產(chǎn)生的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)和自動(dòng)定量,從而成功地實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍。而且,使用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)不需要進(jìn)行凝膠電泳,避免了交叉污染,使反應(yīng)具有更強(qiáng)的特異性和更高的自動(dòng)化程度。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,多重PCR[4]、標(biāo)記 PCR和不對(duì)稱PCR等多種不同的PCR方法都被應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)中,它們的應(yīng)用使PCR技術(shù)擁有了更高的靈敏度和更短的周期[5]。

  1.3 試紙條快速檢測(cè)技術(shù)

  試紙條與試劑盒相比較具有更加易于攜帶、檢測(cè)更加迅速等優(yōu)勢(shì)。在實(shí)際檢測(cè)過程中,特別是現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè),并不一定需要對(duì)每個(gè)樣品都獲得定量數(shù)據(jù) 而只需要定性地判別出某個(gè)樣品是否含有某種農(nóng)獸藥,含量是否超過規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)既可[6]。因此只需要幾分鐘或十幾分鐘就可以獲得結(jié)果的快速檢測(cè)試紙條是最為合 適的檢測(cè)工具[7]。試紙條技術(shù)與試劑盒相類似,其特點(diǎn)是以微孔膜作為固相載 體。標(biāo)記物可用酶或各種有色微粒子,如彩色乳膠、膠體金、膠體硒等,以紅色的膠體金最為常用。固相膜的特點(diǎn)在于其類似濾紙的多孔性。液體可穿過固相膜流出,也可以通過毛細(xì)管層析作用在膜上向前移行。常用的固相載體膜為硝酸纖維素膜、尼龍膜等。試紙條技術(shù)主要包括酶標(biāo)記免疫檢測(cè)技術(shù)(immunoenzyme labeling technique)和膠體金標(biāo)記免疫檢測(cè)技術(shù)(immunogold labelling technique)。酶標(biāo)記免疫檢測(cè)技術(shù)是以酶為示蹤標(biāo)記物,而膠體金標(biāo)記免疫檢測(cè)技術(shù)是以膠體金作為示蹤標(biāo)記物,應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng)的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)。

  1.4 流動(dòng)注射免疫分析技術(shù)

  流動(dòng)注射免疫分析法是將速度快、自動(dòng)化程度高、重現(xiàn)性好的流動(dòng)注射分析與特異性強(qiáng)、靈敏度高的免疫分析集為一體。這種分析方法具有分析時(shí)間短、需要樣品量小和操作簡便等特點(diǎn)[8]。利用FIIA對(duì)一些樣品分析,測(cè)定耗時(shí)不足 1min。FIIA有:均相FIIA和非均相FIIA。流動(dòng)注射免疫分析主要包括:流動(dòng)注射脂質(zhì)體免疫分析技術(shù)、流動(dòng)注射熒光檢測(cè)、流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光檢測(cè)、流動(dòng)注射分光光度檢測(cè)和流動(dòng)注射電化學(xué)檢測(cè)。利用FIIA 是一種靈敏性、專一性、準(zhǔn)確性好、快速、節(jié)約成本的方法,樣品也不需要預(yù)處理和富集。

  2 結(jié)語

  隨著經(jīng)濟(jì)的全球化發(fā)展和農(nóng)產(chǎn)品的跨區(qū)域、跨國際流通,對(duì)農(nóng)產(chǎn)品病原菌的檢測(cè)要求也越來越高。從定性和定量兩方面出發(fā),準(zhǔn)確、快速、經(jīng)濟(jì)的檢測(cè) 方法是農(nóng)產(chǎn)品安全檢測(cè)的發(fā)展方向。盡管分子生物學(xué)檢測(cè)方法具有諸多優(yōu)點(diǎn),但目前它們大多處于實(shí)驗(yàn)室階段,不能廣泛應(yīng)用于實(shí)踐,僅能作為標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法的參考。因此,在今后的工作中應(yīng)進(jìn)一步加快研究步伐,建立真正實(shí)用的農(nóng)產(chǎn)品快速檢測(cè)方法。產(chǎn)品快速檢測(cè)方法。

  【參考文獻(xiàn)】

  [1]楊大進(jìn).改革開放30年食品理化檢測(cè)方法的發(fā)展[J].中國食品衛(wèi)生雜志,2009,21(4):309-312.

  [2]尤敏霞.酶聯(lián)免疫吸附法在食品檢驗(yàn)中的應(yīng)用[J].河南預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2009,20(3):237-238,240.

  [3]周曉紅,李暉,楊杏芬.食品中諾如病毒RT-PCR檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J].國外醫(yī)學(xué)衛(wèi)生學(xué)分冊(cè),2009,36(4):234-238.

  [4]宋岱松.多重PCR技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用[J].山東畜牧獸醫(yī),2009,30(5):57-58.

  [5]雷永良,王曉光,葉碧峰,梅建華,柳付明,陳莎彬,蘭進(jìn)權(quán),李永芬,陳秀英.實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)在食品污染物監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2009,19(4):828-830,857.

  [6]黃小燕,梁珠嫻,李繁,魯玉花.鹽酸克倫特羅快速檢測(cè)試紙條的應(yīng)用探討[J].云南大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2008,30(S1):446-449.

  [7]高志賢,周煥英.食品安全現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J].上海食品藥品監(jiān)管情報(bào)研究,2008(2):42-46.

  [8]金紹祥.流動(dòng)注射分析法與多種儀器分析聯(lián)用的進(jìn)展[J].理化檢驗(yàn):化學(xué)分冊(cè),2009,45(2):238-241.

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